Klorofyl er et grønt pigment, der findes i højere planter og alle andre fotosyntetiske organismer. Klorofyl A og klorofyl B er opløselige i ethanol, ether og acetone og andre opløsningsmidler, uopløselige i vand og petroleumsether, kan derfor bruge polære opløsningsmidler som acetone, methanol, ethanol, ethylacetat og så videre til at ekstrahere klorofyl.
Klorofylekstraktionsproces:
Klorofylekstraktion fremstilles i et halvmørkt rum ved 25 grader C. Ekstraktionstrinene er som følger:
(1) Tag 1000 gram friske grønne blade og knus dem i en Wechsler.
(2) Læg de knuste 1000 gram grønne blade i acetone med en lille mængde calciumcarbonat (temperatur 20 grader) til ekstraktion, indtil bladfragmenterne er farveløse efter filtrering og rensning.
(3) Kom den filtrerede acetoneekstrakt i en tragt indeholdende 1 liter petroleumsether og 100 ml acetone, og drej derefter forsigtigt, mens du tilsætter destilleret vand, indtil det er lagdelt. De fleste af acetone og vandopløselige urenheder i vandlaget kasseres, hvilket kun efterlader petroleumsetheropløsning.
(4) Efter at petroleumsetheropløsningen er renset igen med destilleret vand, renses den mere end 5 gange med 200ml80 procent methanolopløsning indeholdende petroleumsether og 0,01 g oxalsyre, og til sidst opnås en gulgrøn suspension .
(5) Tør suspensionen med vandfrit natriumsulfat, og infiltrer den i en søjle lavet af 3 cm tykt saccharosepulver. Rens derefter de udfældede pigmenter for at fjerne carotenoider og få dem til kun at indeholde naturligt klorofyl.
(6) Saccharosekolonne indeholdende naturligt klorofyl er opdelt i to lag, det grønne lag har 4-10mm klorofyl B-lag, det andet blå lag er 2-6mm klorofyl A-lag.
(7) Den del, der er placeret i midten af det blå lag (ca. halvdelen af det blå lag) sættes i ether, suspensionen filtreres og ekstraheres, renses med destilleret vand, tørres med natriumsulfat og filtreres med redskaber for at opnå klorofyl EN.
(8) Fjern den midterste del af det grønne lag i (6), og kom det hurtigt i etheren til filtrering og vask for at lave klorofyl B-etheropløsning.
Hvordan adskilles under ekstraktion?
Kromatografi er en vigtig metode til separation, oprensning og identifikation af organiske forbindelser, især i mikroanalyse er meget brugt. Pigmenter i frugt og grøntsager omfatter hovedsageligt fedtopløseligt caroten, lutein, klorofyl og vandopløseligt anthocyanin. I ekstraktionsforsøg kan vi gøre brug af princippet om lignende blandbarhed vandopløselig anthocyaninfiltrering, som igen kan gøre brug af tyndtlagskromatografi, søjlekromatografi, højtydende væskekromatografi (HPLC) til separation af beta-caroten, lutein og klorofyl, svækket på grund af polariteten af de tre pigmenttyper igen, kan passende vælges enkelt organisk opløsningsmiddel eller forskelligt forhold mellem blandet opløsningsmiddel som ekspansionsmiddel og elueringsmiddel. De optimale separationsbetingelser blev bestemt.
